液氮罐超低溫保存方法概述

　　微生物可以低溫儲(chǔ)存，低溫儲(chǔ)存方法在應(yīng)用領(lǐng)域有廣泛的微生物儲(chǔ)存方法。營(yíng)養(yǎng)混亂的微生物種，如其他儲(chǔ)存方法不能堅(jiān)持其活力(如植物病原細(xì)菌)，一般可以低溫儲(chǔ)存(ATCC1983);Halliday，Baker1985)。

　　這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷藏小管或安瓿中的細(xì)胞，直到-150℃，然后將這些小管保存在-150℃～-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護(hù)劑不同于凍干法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是一種常見(jiàn)的ATCC、由二甲亞砜(5%)和培養(yǎng)液制成的混合物儲(chǔ)存在大多數(shù)細(xì)胞株中。

　　這種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞可以防止內(nèi)膜的冷藏?fù)p傷。保存在低溫容器中的細(xì)胞在恢復(fù)時(shí)必須小心操作。當(dāng)小管被加熱時(shí)，霜凍會(huì)殺死細(xì)胞，適當(dāng)?shù)牟僮骺梢苑乐惯@種事故。只要靈巧地冷凍和清潔試驗(yàn)產(chǎn)品，就可以減少活力的丟失。方法是將密封的小管靈巧地放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然后打開(kāi)支管，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)液中。低溫儲(chǔ)存的微生物必須始終保存在非常低的溫度環(huán)境中，因此需要液氮罐。在長(zhǎng)期儲(chǔ)存的過(guò)程中，必須經(jīng)常注意填充液氮。

　　這種儲(chǔ)存方法比凍干法需要更多的資金，包括保持儲(chǔ)存溫度所需的勞動(dòng)力和液氮。

　　病毒低溫儲(chǔ)存所需材料有：熱收縮塑料管(NuncCryoflex)，液氮罐、防割手套和面具、記號(hào)筆、汽體噴燈、液氮保溫瓶。

　　2方法

　　(1)切一段兩側(cè)各超過(guò)冷凍管長(zhǎng)度2cm的熱收縮塑料管。干式液氮罐

　　(2)冰浴幾分鐘(分配培養(yǎng)的上清培養(yǎng)液，或分配培養(yǎng)液中的細(xì)胞溶解物)，用殺菌移液管將0.2ml冰浴的上清懸液分配到冷凍管中，擰緊外蓋。

　　(3)將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中間，刺入適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽。

　　(4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管，并將其包裹在冷凍管中。切記不要用過(guò)高的溫度加熱熱收縮塑料管。

　　(5)小心加熱熱縮塑料管兩側(cè)，用大鑷子夾住管端口，直至完全密封。

　　(6)將密封好的冷凍管迅速冷藏在配有液氮的保溫瓶中(操作時(shí)需要戴口罩和手套)。

　　(7)將冷藏的冷凍管放入液氮罐的方格中，記錄樣品的具體儲(chǔ)存方向、實(shí)驗(yàn)序列號(hào)和儲(chǔ)存日期。

　　(8)需要時(shí)間，靈巧地從液氮罐中取下試品，放入37℃水浴箱冷凍后，用解剖刀頭將熱收縮塑料管切割在冷凍管的硅化墊圈處。擰開(kāi)冷凍管外蓋時(shí)，不要求去除熱收縮塑料管。