液氮罐超低溫保存方法概述

　　微生物可以低溫儲存，低溫儲存方法在應用領域有廣泛的微生物儲存方法。營養混亂的微生物種，如其他儲存方法不能堅持其活力(如植物病原細菌)，一般可以低溫儲存(ATCC1983);Halliday，Baker1985)。

　　這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷藏小管或安瓿中的細胞，直到-150℃，然后將這些小管保存在-150℃～-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護劑不同于凍干法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是一種常見的ATCC、由二甲亞砜(5%)和培養液制成的混合物儲存在大多數細胞株中。

　　這種化學物質進入細胞可以防止內膜的冷藏損傷。保存在低溫容器中的細胞在恢復時必須小心操作。當小管被加熱時，霜凍會殺死細胞，適當的操作可以防止這種事故。只要靈巧地冷凍和清潔試驗產品，就可以減少活力的丟失。方法是將密封的小管靈巧地放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然后打開支管，將內容物轉移到培養液中。低溫儲存的微生物必須始終保存在非常低的溫度環境中，因此需要液氮罐。在長期儲存的過程中，必須經常注意填充液氮。

　　這種儲存方法比凍干法需要更多的資金，包括保持儲存溫度所需的勞動力和液氮。

　　病毒低溫儲存所需材料有：熱收縮塑料管(NuncCryoflex)，液氮罐、防割手套和面具、記號筆、汽體噴燈、液氮保溫瓶。

　　2方法

　　(1)切一段兩側各超過冷凍管長度2cm的熱收縮塑料管。干式液氮罐

　　(2)冰浴幾分鐘(分配培養的上清培養液，或分配培養液中的細胞溶解物)，用殺菌移液管將0.2ml冰浴的上清懸液分配到冷凍管中，擰緊外蓋。

　　(3)將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中間，刺入適當的標簽。

　　(4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管，并將其包裹在冷凍管中。切記不要用過高的溫度加熱熱收縮塑料管。

　　(5)小心加熱熱縮塑料管兩側，用大鑷子夾住管端口，直至完全密封。

　　(6)將密封好的冷凍管迅速冷藏在配有液氮的保溫瓶中(操作時需要戴口罩和手套)。

　　(7)將冷藏的冷凍管放入液氮罐的方格中，記錄樣品的具體儲存方向、實驗序列號和儲存日期。

　　(8)需要時間，靈巧地從液氮罐中取下試品，放入37℃水浴箱冷凍后，用解剖刀頭將熱收縮塑料管切割在冷凍管的硅化墊圈處。擰開冷凍管外蓋時，不要求去除熱收縮塑料管。